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>Revistas >Biotecnología Aplicada >Año 2015, No. 2


Hardy E, Quintana D, Pentón G, Abrahantes MC
Escalado de la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida-tinción inversa-extrusión-elución pasiva para la recuperación directa de milígramos de proteínas recombinantes
Biotecnol Apl 2015; 32 (2)

Idioma: Inglés
Referencias bibliográficas: 6
Paginas: 2301-2305
Archivo PDF: 417.14 Kb.

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RESUMEN

La extrusión de fragmentos de gel, a través de una malla metálica con un tamaño promedio de ranura de 32 µm que se encuentra insertada en el fondo de una jeringuilla de 1 mL, es un método útil para aumentar la elución pasiva de proteínas. Este método de extrusión funciona mediante la fragmentación de geles en pedazos extremadamente pequeños, para maximizar el área superficial y minimizar la distancia promedio que cada molécula de proteína tiene que difundir. Sin embargo, el microextrusor de geles no es práctico cuando decenas de fragmentos de gel de 0.5-1.5 mm se deben procesar de manera simultánea, para recuperar miligramos de la proteína blanco. El proceso completo es largo, muy tedioso, laborioso y requiere de habilidades para la manipulación del instrumental. Estas desventajas también se manifiestan cuando un fragmento de gel más grueso (por ejemplo, de 6-12 mm) se debe procesar para la elución de las proteínas que contiene. En este trabajo proponemos la solución a este problema, mediante el remplazo del microextrusor de gel por un agitador de alta velocidad (Ultraturrax®, Ika). La aplicabilidad y utilidad del nuevo procedimiento se demostró en la elución y la recuperación de milígramos de pertactinas (Prn) separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida. Los recobrados de elución totales fueron de un 67.6 % para la Prn de tipo 1 (6.5 mg) y 88.5 % para la Prn de tipo 2 (8.5 mg total). Como promedio, el recobrado del proceso fue de 78 ± 14.8 % de proteína. Como se deseaba, el nuevo procedimiento no varió ni la movilidad electroforética ni provocó la aparición de ningún producto de degradación visible en las muestras de proteínas purificadas, y estas fueron detectadas con el uso del anticuerpo monoclonal anti-Prn 1 (PeM19). En consecuencia, el nuevo protocolo es útil para el aislamiento a la escala de miligramos, de proteínas blanco separadas en geles gruesos de electroforesis.


Palabras clave: electroforesis en gel, proteína, elución, pertactina, purificación, proteína recombinante.


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