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ISSN 1561-2988 (Impreso)

2023, Número 1

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Rev Cubana Farm 2023; 56 (1)


Validación del Lowry modificado para cuantificar el contenido de proteínas de una vacuna antialérgica

Martínez MY, Mateo MM, Ramírez GW, García FA, Revilla FY, Labrada RA

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 21
Paginas: 1-15
Archivo PDF: 387.34 Kb.


RESUMEN

Introducción: Prolinem BT es un candidato vacunal de segunda generación que emplea como ingrediente activo alérgenos purificados a partir del extracto del ácaro Blomia tropicalis, los cuales constituyen los alérgenos mayores de esa especie.
Objetivo: Validación del Lowry modificado a microplacas como técnica para cuantificar el contenido de proteínas totales del ingrediente activo de la vacuna PROLINEM-BT.
Métodos: Para la cuantificación de esas proteínas purificadas se desarrolló y validó la técnica de Lowry modificado a microplacas. Los parámetros estudiados en la validación fueron especificidad, linealidad y paralelismo, precisión y exactitud.
Resultados: El método fue específico en la cuantificación de proteínas totales. El rango de la curva de 20 a 100 μg/mL tuvo un comportamiento lineal (r = 0.99). La técnica es precisa basado en los coeficientes de variación obtenidos (todos inferiores al 5 %) y exacta dado que todos los valores presentaron el 100 % de recobrado.
Conclusiones: Se demostró que el método de Lowry modificado a microplacas es válido para la cuantificación de proteínas totales del ingrediente activo de Prolinem BT.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Pascal D, Matucci A, Rossi O, Vidal C. The disease burden in patients with respiratory allergies induced by house dust mites: a year-long observational survey in three European countries. Clin. Transl. Allergy. 2020;10(27):1-12. DOI: 10.1186/s13601-020-00331-0

  2. Miller JD. The Role of Dust Mites in Allergy. Clinic Rev Allerg Immunol. 2019;57:312-29. DOI: 10.1007/s12016-018-8693-0

  3. Santos E, Asam C, Lackner P, Hofer H, Wallner M, Silva Pinheiro C, et al. Allergens of Blomia tropicalis: An Overview of Recombinant Molecules. Int Arch Allergy Immunol. 2017;172(4):203-14. DOI: 10.1159/000464325

  4. Labrada A. Desarrollo a ciclo completo de las primeras vacunas estandarizadas de alergenos de ácaros para la inmunoterapia del asma en Cuba. La Habana: Editorial Universitaria; 2012. DOI: 10.13140/RG.2.2.31180.26249

  5. Di Felice G, Colombo P. Nanoparticle–allergen complexes for allergen immunotherapy. Int J Nanomedicine. 2017;12:4493-4504. DOI: 10.2147/IJN.S134630

  6. Chang A, Ochoa R, Climent Y, Macías C, Rodríguez L, Valenzuela C, et al. A single dose of SARS-CoV-2 FINLAY-FR-1A vaccine enhances neutralization response in COVID-19 convalescents, with a very good safety profile: An open-label phase 1 clinical trial. The Lancet Regional Health - Americas. 2021;4:100079-090. DOI: 10.1016/j.lana.2021.100079

  7. Ramírez W, Bourg V, Torralba D, Facenda E, Tamargo B, González B, et al. Safety of a proteoliposome from Neisseria meningitides as adjuvant for a house dust mite allergy vaccine. J Immunotoxicol. 2017;14(1):152-59. DOI: 10.1080/1547691X.2017.1346007

  8. Jensen E, Roth F, Jordakieva G, Pali I. Allergens and adjuvants in Allergen Immunotherapy for immune activation, tolerance and resilience. J Allergy Clin Immunol Pract. 2021;9(5):1780-89. DOI: 10.1016/j.jaip.2020.12.008

  9. Mateo M, Ramírez W, Torralba D, Revilla Y, Cruz R, Espinosa BL, García A, et al. LIBRO DE RESÚMENES, Prolinem-BT, vacuna de segunda generación para la alergia a Blomia tropicalis. Revista VacciMonitor. 2022 [acceso 18/04/2022];61. Disponible en: https://vaccimonitor.finlay.edu.cu/index.php/vaccimonitor/article/view/313/512

  10. Samalea R, Torralba D, Martínez D, Ramírez W, Mateo M, Oliva Y, et al. Desarrollo de la formulación, escalado y estabilidad de la vacuna antialérgica de Dermatophagoides siboney adyuvada con gel de hidróxido de aluminio. Revista CENIC Ciencias Biológicas. 2019 [acceso 18/04/2022];49(2):1-14. Disponible en: https://revista.cnic.edu.cu/index.php/RevBiol/article/view/186

  11. European Pharmacopoeia. Monograph on allergen products. 2017 [acceso 18/04/2022]:1063. Disponible en: https://file.wuxuwang.com/yaopinbz/EP9/EP9.0_01__351.pdf

  12. CECMED. Requisitos para las solicitudes de inscripción en el registro de medicamentos de uso humano de productos alergénicos. CECMED: La Habana, 2002 [acceso 19/01/2022]. Disponible en: https://www.cecmed.cu/sites/default/files/adjuntos/Reglamentacion/Reg_30-02.pdf.

  13. Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Protein measurement with the Folin phenol reagent. Journal Biol Chem. 1951;193:265-75. PMID: 14907713

  14. Fryer HJ, Davis GE, Manthrope M, Varon S. Lowry protein assay using a automatic microtiter plate spectophotometer. Anal Biochem. 1986;153(2):262-6. DOI: 10.1016/0003-2697(86)90090-4

  15. Resolución No. 40 del 2014. Anexo No.1 de las Buenas Prácticas para Laboratorios de Control de Medicamentos. Validación de Métodos Analíticos. CECMED; 2014 [acceso 28/12/2021]:1-30. Disponible en: https://www.cecmed.cu/reglamentacion/aprobadas/resolucion-cecmed-40

  16. Zimmer J, Bonertz A, Vieths S. Quality requirements for allergen extracts and allergoids for allergen immunotherapy. Allergol Immunopathol. 2017;45(S1):4-11. DOI: 10.1016/j.aller.2017.09.002

  17. Bonertz RG, Hoefnagel M, Timon M, Slater J, Rabin R. Challenges in the implementation of EAACI guidelines on allergen immunotherapy: A global perspective on the regulation of allergen products. Allergy. 2018;73:64-76. DOI: 10.1111/all.13266

  18. Lehnigk U. Allergen immunotherapy in the European regulatory environment. Medical Writing. 2018 [acceso 28/12/2021];27(1):30-4 ISSN 2047-4814. Disponible en: https://journal.emwa.org/vaccines-and-immunotherapies/allergen-immunotherapy-in-the-european-regulatory-environment/article/3583/lehnigk_-allergen-immunotherapy-in-the-european-regulatory-environment.pdf.

  19. International scientific guideline: Guideline on allergen products: Production and quality issues. EMEA/CHMP/BWP. Adopted by the Therapeutic Goods Administration (TGA). 2007 [acceso 28/12/2021]. Disponible en: https://www.tga.gov.au/resources/resource/international-scientific-guidelines/international-scientific-guideline-guideline-allergen-products-production-and-quality-issues

  20. ICH guideline Q2(R2) Validation of analytical procedures. A Notice by the Food and Drug Administration. 2022 [acceso 28/12/2021]. Disponible en: https://www.federalregister.gov/documents/2022/08/29/2022-18516/q2r2-validation-of-analytical-procedures-and-q14-analytical-procedure-development-international.

  21. Yglesias A, Viera A, Suárez Y, Torres JR, Ochoa R. Validation of Modified Lowry for the Determination of Total Protein Concentration of Rhopalurus junceus Scorpion Venom. Biomed J Sci & Tech Res. 2020;28(3):21627-32. DOI: https://doi.org/10.26717/BJSTR.2020.28.004655




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