Toro GG, Valdés RYC , Rosa GMC, Falcón CV, Cabal MCA

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 24
Paginas: 5-10
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RESUMEN

El uso de técnicas moleculares como pruebas diagnósticas se hace imprescindible en nuestros días. Para poder tener un control positivo adecuado en la prueba cualitativa de RT-PCR para la detección del virus de la hepatitis C (VHC) se clonó una secuencia representativa de la región altamente conservada no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C (VHC). Se seleccionó un paciente positivo al VHC por las pruebas diagnósticas de HCV EIA 3.0 y RIBA HCV 3.0 y con carga viral > 90,000 copias de ARN/mL. Para la clonación de la secuencia representativa de la región estudiada se obtuvo inicialmente ARNviral (ARNv) del VHC a partir del plasma del paciente seleccionado, utilizándose la técnica de transcripción inversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada, se utilizaron iniciadores específicos de la región, el KY-80 y KY-78/FIP y RIP obteniéndose un producto de ADN de 214 pb (ADNi) el cual se insertó en el vector de clonación pGem-T, con el que se construyó el plásmido recombinante pGem-T-5´-UTR, el cual fue transformado en células de E. coli DH5α obteniéndose la línea celular E. coli DH5α pGem-T-5´-UTR como células clonas. A partir de las células clonas se obtuvo ADN (ADNp) del cual se amplificó la región 5´-UTR por PCR utilizándose los iniciadores FIP y RIP, obteniéndose un producto de 214 pb el cual mostró ser eficiente como control positivo en la prueba del VHC por RT-PCR.

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