Rashid B, Manzoor N, Khan LA

Idioma: Ingles.
Referencias bibliográficas: 16
Paginas: 55-59
Archivo PDF: 108.45 Kb.

RESUMEN

En este trabajo se presenta el efecto cuantitativo de la adición de nutrientes/análogos en la tasa de eflujo de H⁺ en células y esferoplastos de Candida albicans. En ausencia de cualquier nutriente, las células de levadura presentan un eflujo promedio de H⁺ de 22.3 nmoles/min/mg de células. La adición de glucosa 5mM al medio estimuló el eflujo de H⁺ en 7.5 veces. Al suplementar el medio con 2-deoxi-D-glucosa, arginina o ácido glutámico se ocasionó una mínima estimulación de 1.37, 1.50 ó 1.42 veces, respectivamente, sobre el control. La adición de xilosa, lisina y prolina careció completamente de efecto. Los esferoplastos control presentaron una tasa de eflujo de H⁺ de 2.0 nmoles/min/mg de células. La estimulación del eflujo de H⁺ por glucosa resultó notablemente reducida (2.22 veces). El eflujo de H⁺ no difirió notablemente respecto al control al suplementar los esferoplastos con análogos de glucosa (2-deoxi-D-glucosa, xilosa) o aminoácidos (arginina, lisina, prolina, glutamato). Estos resultados han sido comparados con el efecto de la adición de nutrientes/análogos en el ciclo hidrolítico del ATP de la PM-ATPasa reportada con anterioridad por este laboratorio. El porcentaje relativo de la enzima comprometida en la forma de E.ADP.P posterior a la adición de glucosa o glutamato (94 y 96%, respectivamente) es comparable con el control (100%). Al mezclar PM-ATPasa con ATP en presencia de otros nutrientes/análogos condujo a la reducción significativa de la forma E.ADP.P en la población. La proporción del complejo E.ADP.P, el cual completa la formación y disociación del complejo E~P (Power-Stroke) es similar al control en presencia de todos los nutrientes/análogos excepto para glucosa. La población de moléculas de PM-ATPasa que culminan el ciclo hidrolítico completo de ATP es mayor en presencia de glucosa (86.4%), comparado con el control (27%), con la adición de glutamato (27.8%) y con la de otros nutrientes/análogos (4.2% a 20.5%). La adición de glucosa afecta positivamente ambas vertientes del ciclo hidrolítico, mientras que otros nutrientes/análogos sólo afectan la primera vertiente del ciclo siendo neutrales con la segunda. La excepcional estimulación del eflujo de H⁺ por glucosa en células de Candida puede por lo tanto correlacionarse con la estimulación de la segunda vertiente del ciclo hidrolítico del ATP.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Shepherd M G, Poulter R T & Sullivan PA, Candida albicans: Biology, genetics and pathogenecity. Annu Rev Microbiol 39 (1985) 579.

2. Serrano R, In vivo glucose activation of the yeast plasma membrane ATPase. FEBS Lett, 156 (1983) 11.

3. Serrano R, Structure and function of proton translocating ATPase in the plasma membranes of plants and fungi. Biochim Biophys Acta 947 (1988) 1.

4. Portillo F, de Larriona I F & Serrano R, Deletion analysis of yeast plasma membrane H+ ATPase and identification of a regulatory domain at the carboxyl terminus. FEBS Lett 247 (1989) 381.

5. Auer M, Scarborough GA and Kuhlbrandt W (1998) Three-dimensional map of the plasma membrane H+-ATPase in the open conformation. Nature 392: 840.

6. Eraso P and Portillo F (1994) Molecular mechanism of regulation of yeast plasma membrane H+-ATPase by glucose. Interaction between domains and identification of new regulatory sites. J Biol Chem 269 (14): 10393.

7. Manzoor N, Amin M and Khan LA (1999) Pre-steady state kinetic studies on H+-ATPase from Candida albicans. J Biochem (Tokyo) 126 (4): 776.

8. Rashid B, Manzoor N, Amin M & Khan L A, Effect of glucose, its analogs and some amino acids on pre-steady state kinetics of ATP hydrolysis by PM-ATPase of pathogenic yeast (Candida albicans). Korean J Biol Sci 8 (2004) 307.

9. Manzoor N, Rashid R, Amin M & Khan L A, Nutrient associated changes in plasma membrane H+ ATPase activity of permeabilized Candida albicans cells. Indian J Biochem Biophys 37 (2000) 241.

10. Serrano R, Effect of ATPase inhibitors on the proton pump of respiratory deficient yeast, Eur J Biochem 105 (1980) 419.

11. Lapathitis G & Kotyk A, Different sources of acidity in glucose elicited extracellular acidification in the yeast Saccharomyces cerevisae. Biochem Mol Biol Int 46 (1998) 973.

12. Romero I, Maldonado AM, Eraso P, Glucose-independent inhibition of yeast plasma-membrane H+ ATPase by calmodulin antagonists. Biochemical Journal 322 (1997), 823.

13. De la Fuente N, Maldonado AM, Portillo F, Glucose activation of the yeast plasma membrane H+ ATPase requires the ubiquitin-proteasome proteolytic pathway. FEBS Letters 411 (1997) 308.

14. Coccetti P, Tisi R, Martegani E, Souza Teixeira, Lopes BR, De MC, Thevelein JM, The PLC1 encoded phospholipase C in the yeast Saccharomyces cerevisae is essential for glucose-induced phosphatidlyionositol turnover and activation of plasma membrane H+ ATPase. Biochimica et Biophysica Acta-Molecular Cell Research 1405 (1998), 147.

15. Souza MAA, Tropia MJ, Brando RL. New aspects of the glucose activation of H+ ATPase in the yeast Saccharomyces cerevisae. Microbiology 147 (2001) 2849.

16. Leechi S, Allen KE, Prado, Mason AB, Slayman CW, Conformational changes of yeast plasma membrane H+ ATPase during activation by glucose: Role of threonine-912 in the carboxy-terminal tail. Biochemistry 44 (2005), 16624.