Arellano CMD, Borrego A, Soto CE, Rivas CR

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 18
Paginas: 86-91
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RESUMEN

Objetivo: mostrar el comportamiento de los espermatozoides humanos expuestos a calmodulina (CaM) y a otros factores, como ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina-etanosulfónico (HEPES), adenosín trifosfato (ATP) y voltajes.
Material y método: la muestra fue de tres pacientes con cinco días de abstinencia sexual. Se utilizaron una cámara de Makler (obtenida de Invitrogen^®), un amplificador de patch clamp EPC 7 (HEKA Elektronik) y un sistema de adquisición analógico-digital de 12 bits (Indec Systems), así como ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina-etanosulfónico (HEPES), adenosín trifosfato (ATP) y calmodulina (CaM), obtenidos de Sigma-Aldrich. Las muestras en fresco se refrigeraron a 4°C durante 24 horas. Posteriormente, se realizó la espermatobioscopia directa (EBD) utilizando los criterios de la Organización Mundial de la Salud (1999) y teniendo en cuenta el volumen de la muestra, el número de espermatozoides que contenía cada mililitro y el porcentaje de espermatozoides con movilidad, y ésta se clasificó así: A) movimiento progresivo rápido, B) movimiento progresivo lento, C) in situ, y D) sin movimiento.
Resultados: las muestras perdieron movimiento después de permanecer 24 horas en refrigeración; se cuantificaron 42 X 10⁶ espermatozoides sin movimiento. Se utilizó un mililitro de solución de HEPES y los espermatozoides recuperaron el movimiento (B + C) en 80%. La utilización de CaM (1 µg/µL) y ATP (1 mM) también activó a los espermatozoides, ya que 90 a 100% de éstos recuperaron el movimiento (A + B). En el grupo control hubo pérdida de movimiento a las ocho horas; con CaM el movimiento se perdió aproximadamente a los 20 min, y las moléculas de CaM y ATP se asociaron al parecer, ya que ambas moléculas se encuentran implicadas en mantener el equilibrio de Ca²⁺, lo cual confirió mayor tiempo de movimiento espermático (aproximadamente 20 horas). En el grupo control (tratamiento 1) los espermatozoides perdieron movimiento debido a que durante 24 horas permanecieron a 4°C. Con HEPES (tratamiento 2) el movimiento de los espermatozoides aumentó. Con la utilización de CaM-ATP (tratamiento 3) se observó que el movimiento espermático fue superior al tratamiento 1 (grupo control) y al tratamiento 2 (con HEPES).
Conclusión: con la calmodulina (CaM) el movimiento se pierde a los 20 min. Con la utilización de HEPES el movimiento de los espermatozoides aumentó por los fosfatos que contiene. CaM y ATP mostraron asociación, lo que le confirió mayor tiempo de movimiento progresivo (A + B) al espermatozoide, y cuando los espermatozoides fueron sometidos a diferentes estímulos eléctricos, se detectó que el movimiento espermático desciende cuando se aplican mayores estímulos eléctricos, probablemente por alteración de las proteínas voltaje dependientes, que son importantes para la capacitación espermática. La apertura de los canales de Ca²⁺ de la membrana plasmática, dependientes de CaM y ATP, probablemente promueve la capacitación espermática. Con los resultados de este trabajo la calmodulina (CaM) puede establecerse como una nueva técnica de reproducción asistida en inseminación artificial en humanos.

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