Miranda AA, Justiz LAC, Mures DYL, Romaguera FY

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 13
Paginas: 248-256
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RESUMEN

Introducción: la obtención de anticuerpos monoclonales en líquido ascítico ha ido decayendo paulatinamente por la aparición de alternativas de producción in vitro, que permiten alcanzar mayores volúmenes y un control más riguroso del proceso productivo, lo que incrementa la reproducibilidad de procesos y la calidad de los productos.
Objetivo: evaluar dos métodos de producción de sobrenadante de cultivo rico en una inmunoglobulina de ratón del tipo IgG2b, aglutinadora de hematíes humanos portadores del antígeno del grupo sanguíneo B, según el sistema ABO; la cual es secretada por el hibridoma C6G4.
Métodos: se evaluaron dos métodos de producción del anticuerpo con el empleo de un biorreactor CELLine, útil como modelo para la obtención de anticuerpos monoclonales en cultivos de alta densidad celular. Los métodos se diferenciaron esencialmente en la densidad celular de siembra en el biorreactor y en la duración del periodo de fermentación entre la siembra y la cosecha del caldo de cultivo rico en anticuerpos. Para cada método se determinó la concentración específica de anticuerpos y la potencia de aglutinación del sobrenadante, así como la densidad y la viabilidad celular del cultivo alcanzadas en el momento de la cosecha.
Resultados: se observó que ambos métodos generaron sobrenadantes de cultivo con una potencia de aglutinación similar, a pesar de que se encontraron diferencias en el resto de las variables medidas. Si bien uno de los métodos produjo una mayor concentración de anticuerpos en el sobrenadante, no se observaron diferencias en la potencia de aglutinación de los sobrenadantes obtenidos por ambas alternativas.
Conclusiones: los dos métodos estudiados permitieron obtener volúmenes semejantes de sobrenadante anti-B con diferentes concentraciones de anticuerpos, pero con una potencia de aglutinación similar. La principal diferencia residió en que uno de los métodos permitió obtener el mismo volumen del producto en un tiempo sensiblemente menor.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

1. Zhang C. Hybridoma technology for the generation of monoclonal antibodies. En: Proetzel G, Ebersbach H, Editores. Antibody Methods and Protocols. New York: Humana Press; 2012. p. 117-35.

2. Vermasvuori R, HurmeM. Economic comparison of diagnostic antibody production in perfusion stirred tank and in hollow fiber bioreactor processes. Biotechnol Prog. 2011 Nov-Dec;27(6):1588-98.

3. Hendriksen CF, de Leeuw W. Production of monoclonal antibodies by the ascites method in laboratory animals. Res Immunol. 1998 Jul-Aug;149(6):535-42.

4. Bareither R, Pollard D. A review of advanced small scale-parallel bioreactor technology for accelerated process development: Current state and future need. BiotechnolProg. 2011 Jan-Feb;27(1):2-14.

5. Karuppaiya A, Cheah SH, Mohd S, Kamal WH, Zulkifli MH. Generation and characterization of monoclonal antibodies against prostate-specific antigen. Hybridoma (Larchmt). 2009 Apr;28(2):133-7.

6. Eibl R, Kaiser S, Lombriser R, Eibl D. Disposable bioreactors; the current stateof- the-art and recommended applications in biotechnology. Appl Microbiol Biotechnol. 2010 Mar;86(1):41-9.

7. Trujillo-Roldán MA, Valdez-Cruz NA. El uso de biorreactores desechables en la industria biofarmacéutica y sus implicaciones en la ingeniería. Dyna. 2009 Jun;76(158):275-83.

8. Diekmann S, Dürr C, Herrmann A, Lindner I, Jozic D, ed. Single use bioreactors for the clinical production of monoclonal antibodies-a study to analyze the performance of a CHO cell line and the quality of the produced monoclonal antibody. BMC Proceedings. 2011 Nov 22;5(8):103.

9. Bruce MP, Boyd V, Duch C, White JR. Dialysis-based bioreactorsystems for the production of monoclonal antibodies. Alternatives toascites production in mice. J Immunol Methods. 2002 Jun 1;264(1-2):59-68.

10. Mittermaier J, Zang-Gandor MO. Long-Term High Level Protein Expression in Adherent, Protein-free Growing BHK Cells Using INTEGRA CELLine adhere 1000 Bioreactor Flasks. Genetic Engineering News. 2004;24(12):42.

11. Schlaeger EJ, Eggimann B, Gast A. Proteolytic activity in the culture supernatants of mouse hybridoma cells. DevBiol Stand. 1987;66:403-8.

12. Spens E, Häggström L. Protease activity in protein-free NS0 myeloma cell cultures in vitro cell. DevBiolAnim. 2005 Nov-Dec;41(10):330-6.

13. CELLine Operating instructions. INTEGRA Biosciences. [citado 11 jun 2013]. Disponible en: http://www.integrabiosciences. com/sites/pdf/operating_instructions/90100_V04_OI_CELLine_EN.pdf