medigraphic.com
ISSN 1560-4381 (Impreso)

2016, Número 3

<< Anterior Siguiente >>

Correo Científico Médico 2016; 20 (3)


Purificación del toxoide pertúsico de Bordetella pertussis

Hernández MM, Rivas RED, Llanos RHD, Álvarez BMA

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 11
Paginas: 468-478
Archivo PDF: 383.51 Kb.


RESUMEN

Introducción: el toxoide pertúsico es una proteína muy utilizada en las vacunas acelulares contra la tosferina. Desarrollar un protocolo para su purificación con pocos pasos y con parámetros de purificación adecuados, es muy importante para su caracterización química y la valoración de los efectos adversos que puede provocar al inocular principalmente a ratones. Los protocolos de purificación descritos en la literatura científica involucran varios pasos de purificación y bajos rendimientos.
Objetivo: desarrollar un protocolo de purificación del toxoide pertúsico que garantice un grado de pureza alto y un rendimiento de más de 80% a partir de cultivos de un mutante de B. pertussis obtenido en el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC).
Métodos: para purificar el toxoide se usó una columna de intercambio catiónico Fractogel EMD SO-3 y se eluyó incrementando el pH y la concentración salina por pasos hasta obtener los resultados esperados. La determinación de proteínas totales se realizó mediante el micrométodo linealizado de Bradfor10 usando como patrón albúmina de suero bovina (BSA).
Resultados: se obtuvo 3,28 mg de toxoide por cada litro de cultivo con un rendimiento de 86,7% y un grado de pureza de 96,7%.
Conclusiones: el procedimiento de purificación descrito permite obtener el toxoide pertúsico con un rendimiento mayor que el 80% y alto grado de pureza, lo que garantiza la calidad requerida para su caracterización bioquímica e inmunológica.


REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

  1. Ulloa MT. Bordetella pertussis. Rev Chilena Infectol. 2008 [citado 31 mar 2015]; 25 (2): 115-115. Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182008000200005&lng=en&nrm=iso&tlng=en

  2. Mattoo S, Cherry JD. Molecular pathogenesis, epidemiology, and clinical manifestations of respiratory infections due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies. Clin Microbiol Rev. 2005 [citado 31 may 2011]; 18(2):326-382. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1082800/

  3. Landys Chovel M, Figueroa JM, Perdomo V. Limitaciones del ensayo de toxicidad específica para el componente pertussis de células completas. Vaccimonitor. 2008. [citado 21 mar 2014]; 17(3): 6-12. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2008000300002&lng=es&nrm=iso

  4. Uhl MA, Miller JR. Central role of the BvgS receiver as a phosphorylated intermediate in a complex tow-component phosforelay. J Biol Chem. 1996 [citado 21 mar 2014]; 271 (52): 33176-33180. Disponible en: http://www.jbc.org/content/271/52/33176.full.pdf

  5. Locht C, Antoine R, Jacob Dubuisson F. Bordetella pertussis, Molecular pathogenesis under multiple aspects. Curr Opin Microbiol.1992 [citado 21 mar 2014]; 4(1):82-89. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=.+Bordetella+pertussis.+Molecular+pathogenesis++under+multiple+aspects

  6. Nencioni L, Pizza MG, Volpini G, De Magistris MT, Giovannoni F, Rappuoli R. Properties of the B oligomer of pertussis toxin. Infect Immun. 1991 [citado 21 mar 2014]; 59(12):4732-4734 Disponible en: http://iai.asm.org/content/59/12/4732.abstract

  7. Özcengiza E, Kılınçb K, Büyüktanıra Ö, Günalp A.Rapid purification of pertussis toxin (PT) and filamentous hemagglutinin (FHA) by cation-exchange chromatography. Vaccine. 2004 [citado 21 mar 2011]; 22(11-12): 1570-1575. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0264410X03007552

  8. Sato Y, Kimura M, Fukumi H. Developmen of pertussis component vaccine in japan. Lancet.1984 [citado 21 mar 2011]; 1(8369):122-126.Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6140441

  9. SeKura RD, Fish F, Manclark CR, Meade B, Zhang YL. Pertussis toxin. Affinity Purification of a new ADP-ribosyltransferase. J Biol Chem. 1983 [citado 21 mar 2014]; 258(23):14647-14651 Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6315733

  10. Falero Morejón A, Jiménez L, Fando R .Aplicación del método de Bradford en la determinación de proteínas en el proceso de purificación de la toxina pertúsica. VI Congreso virtual sobre gestión de calidad en laboratorios; 2011 feb 1-sep 15.España: IBEROLAB; 2011. Disponible en: http://www.magrama.gob.es/es/ministerio/servicios/publicaciones/IBEROLAB_2011_primeras_p%C3%A1ginas_tcm7-208996.pdf

  11. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacterophage T4. Nature. 1970 [citado 21 mar 2014]; 227: 680-685 Disponible en: http://www.nature.com/nature/journal/v227/n5259/pdf/227680a0.pdf




2020     |     www.medigraphic.com