Bonilla E, Párraga M, López LA, Escolar F, Mazo J

Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 10
Paginas: 2-6
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RESUMEN

La cuantificación de la expresión génica mediante los métodosclásicos requiere de cantidades de RNAm difíciles de obtener cuandoel número de muestras experimentales es limitado. Recientementeha sido introducida una nueva tecnología que permite lacuantificación precisa de los amplicones durante cada ciclo delPCR (LightCycler™ Roche). En este estudio hemos utilizado estatecnología para analizar la expresión de algunos genes en ovocitosfetales de ratón en cultivo. Las reacciones de RT-PCR se llevaron acabo a partir de lisados completos de ovocitos para evitar la pérdidade RNAm causada por su aislamiento. La amplificación de DNAgenómico se previno mediante su digestión con DNAsa libre deRNAsas. La metodología empleada nos permitió la amplificación ycuantificación de RNAms con expresión alta (e.g. proteína ribosomalS16) y moderada (Cu/Zn superóxido dismutasa) a partir de sólo dosovocitos. Para la amplificación y cuantificación de transcritosescasos (Metaxina) se requirió de un mínimo de ocho ovocitos. Laamplificación por PCR usando esta metodología puede ser muy útilen el análisis de la expresión génica en condiciones en las que elmaterial biológico disponible es muy limitado.

REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)

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