Noyola Sánchez, Paulina¹; Guerrero Velázquez, Celia²; Hernández Troncoso, Rita Stephanie¹; Malespin García, Karla Elizabeth¹; Chávez Maciel, José María¹; Rodríguez Montaño, Ruth²

Idioma: Español/Inglés [English version]
Referencias bibliográficas: 29
Paginas: 169-177
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RESUMEN

Introducción: En la fase de dentición mixta existe un control entre la erupción y reabsorción dental mediante la osteoclastogénesis y la osteogénesis. Estos procesos están regulados por el eje IL-23/IL-17 y el sistema RANK/RANKL/OPG. Se conoce que la IL-23 tiene un papel crucial en la producción de IL-17 y RANKL entre otras citocinas. La IL-17 activa diferentes células inmunes y no inmunes como los fibroblastos y éstos a su vez pueden secretar RANKL. Esto indica que la IL-23 de forma directa e indirecta estimula la producción de RANK, el cual da paso a la activación de los osteoclastos. Objetivo: Evaluar los niveles de IL-23 en saliva de niños en fase de dentición mixta con clase molar I y II. Material y métodos: Se obtuvo muestra de saliva y se almacenó a -80 ^oC hasta la determinación de IL-23 mediante ELISA. Resultados: Las concentraciones de IL-23 en saliva no mostraron diferencia significativa entre los niños con dentición clase molar I y II. Conclusión: Hasta el momento estos hallazgos indican que la regulación de la IL-23 en este proceso fisiológico no difiere de acuerdo al tipo de oclusión molar.

INTRODUCCIóN

La erupción dental es el proceso mediante el cual los dientes en desarrollo emergen a la cavidad oral. Este proceso se inicia tan pronto como concluye la formación de la corona y raíz de los dientes deciduos, seguido del proceso de recambio dental, donde los dientes deciduos se caen mientras emergen los dientes permanentes. Esta fase de transición se conoce como dentición, en la cual están presentes dientes deciduos y permanentes y se clasifica en dentición mixta temprana y dentición mixta tardía.¹

Una vez que los dientes erupcionan se establece la oclusión dental (relación de cúspides entre los primeros molares superiores e inferiores y se clasifica en tres tipos: clase molar I, clase molar II y clase molar III, siendo las más prevalentes la clase molar I y II.²

En la fase de dentición mixta existe un control entre la erupción y reabsorción dental mediante la osteoclastogénesis y la osteogénesis. Estos dos procesos fisiológicos dependen de la regulación de diversas citocinas, principalmente del eje IL-23/IL-17 y el sistema RANK/RANKL/OPG que promueve la diferenciación de los osteoclastos, mientras que el IFN-α, IFN-β, IL-3, IL-4, IL-10 desregulan la diferenciación de los osteoclastos.³

El receptor activador del factor nuclear kappa B (RANK) es una proteína transmembrana tipo I expresada ubicuamente en musculoesquelético, timo, hígado, colon, intestino delgado, glándula suprarrenal, osteoclastos, células epiteliales de la glándula mamaria, próstata y páncreas.⁴ Por otra parte, el gen del ligando para RANK (RANKL) da lugar a variantes de empalme que codifican dos formas de proteínas transmembranas tipo II y una forma de proteína secretada.⁵ Aunque la expresión RANKL alta se puede encontrar en ganglios linfáticos, timo y pulmón, sólo se pueden detectar niveles bajos de RANKL en bazo, médula ósea, sangre periférica, leucocitos, corazón, placenta, musculoesquelético, estómago o tiroides. La unión de RANKL a su receptor RANK proporciona la señal crucial para impulsar el desarrollo de los osteoclastos a partir de células progenitoras hematopoyéticas así como para activar osteoclastos maduros. OPG regula negativamente la unión de RANKL a RANK y por lo tanto, inhibe la rotación ósea por osteoclastos. A medida que se observa un aumento de la actividad osteoclástica en pacientes con osteoporosis, metástasis o artritis reumatoide, el eje RANK-RANKL-OPG parece ser la diana terapéutica para distintas enfermedades óseas,⁴ contrariamente la osteoprotegerina (OPG), que es un receptor de señal para RANKL, puede regular la osteoclastogénesis al inhibir a RANKL.^6,7

La IL-23 es una citocina heterodimérica compuesta por dos subunidades enlazadas por un puente de disulfuro: Una subunidad soluble p40 y una subunidad de haz tetra-helical p19.^8,9 El receptor a IL-23 está formado por una subunidad llamada IL-23R que forma un complejo con la subunidad beta 1 del receptor a IL-12 (IL-12Rβ1). La señalización mediante IL-23R induce la fosforilación de janus cinasa 2 (JAK2) y tirosina cinasa 2 (tyk2), la cual activa STAT3, permitiendo la sobrerregulación de RORγT y subsecuentemente incrementa la expresión de citocinas proinflamatorias. La IL-23 tiene un papel crucial en la inducción y función de células Th17.^10-12 Además, la unión de IL-23 a su receptor en células Th17 activa a RORγT+, que induce la sobreexpresión del IL-23R, de esta manera provee una retroalimentación positiva para el mantenimiento y propagación de estas células.¹²

Asimismo, la IL-23 induce la producción de IL-17 y RANKL, entre otras citosinas.^5,12 La IL-17 forma parte de una familia de seis isoformas nombradas de la "A" a la "F", de las cuales la isoforma A y la F pueden formar dímeros. La IL-17 puede activar diferentes células inmunes y no inmunes como los fibroblastos y éstos a su vez pueden secretar RANKL.^5,13 Esto indica que la IL-23 de forma directa e indirecta estimula la producción de RANKL.

Por otra parte, se conoce que la fuerza de oclusión varía de acuerdo a la relación dental entre el maxilar y la mandíbula.¹⁴ En este sentido, se ha observado en ratas un aumento en la expresión de RANKL en dientes con trauma oclusal que sin trauma oclusal.¹⁵ Asimismo, anteriormente evaluamos las concentraciones de RANKL en dientes permanentes y deciduos en niños con dentición mixta sin detectar diferencias significativas entre los dos grupos de denticiones, por lo cual se considera que el RANKL se mantiene constante durante el proceso de recambio dental.¹⁶

Debido a que la IL-23 y la IL-17 estimulan la producción de RANKL y esta molécula participa en la remodelación ósea y el proceso de erupción dental, el objetivo de este estudio fue evaluar inicialmente los niveles de IL-23 en saliva de niños en la fase de dentición mixta y a su vez conocer si existe variación cuando se presenta clase molar I o II.

MATERIAL Y MéTODOS

Estudio transversal realizado en la Clínica de Odontopediatría de la Universidad de Guadalajara. A todos los padres o tutores de los niños atendidos en esta clínica se les invitó a participar. El objetivo del estudio y el procedimiento para la obtención de la muestra se explicó a los padres o tutores. A todos los padres o tutores que aceptaron que los niños participaran en el estudio, se les proporcionó consentimiento informado por escrito de acuerdo al tratado de Helsinki 2013.

Se incluyeron del estudio niños y niñas con rango de edad de cinco a ocho años con dentición mixta temprana, primeros molares inferiores y superiores erupcionados. El tipo de oclusión se evaluó de acuerdo a la clasificación de Angle² y se dividieron en dos grupos: clase molar I o II. No se incluyeron pacientes que presentaran caries, traumatismo dental, enfermedad periodontal, amelogénesis o dentinogénesis imperfecta, enfermedades sistémicas, presencia de síndromes, hábitos orales o haber recibido tratamiento ortopédico u ortodóncico o que hayan tomado medicamentos antiinflamatorios.

OBTENCIóN DE SALIVA

Se solicitó al paciente salivar dentro de un contenedor estéril de 100 mL por aproximadamente uno a dos minutos. Después se agregaron 20 μL de Buffer fosfato salino (PBS) con inhibidor de proteasas (Complete, Roche Diagnostic GmbH). Posteriormente los tubos se agitaron en el vórtex durante cinco segundos. Se centrifugaron a 12,000 rpm durante 15 minutos a 4 ^oC. Se tomó 1 mL de sobrenadante de saliva en microtubos de 1.5 mL y se almacenó a -80 ^oC hasta la realización del ELISA para IL-23.

ENSAYO DE INMUNOABSORCIóN LIGADO A ENZIMAS (ELISA)

Se añadieron 100 μL de saliva por triplicado a los pozos de las placas de 96 pozos del kit para IL-23R DuoSet^® ELISA Kit (R&D Systems Minneapolis MN, EUA) y se realizó ELISA de acuerdo a las especificaciones del fabricante. La densidad óptica de cada pocillo se determinó usando el lector de microplacas WHY101 (Poweam Medical Systems Co., Nanjing, Jiangsu, China) ajustado a 450 nm con una corrección de longitud de onda a 540 nm. Las concentraciones de la IL-23 de cada muestra se calcularon a partir de la curva estándar según el kit de ensayo y las concentraciones se expresaron como pg/mL.

ANáLISIS ESTADíSTICO

Se realizó el análisis estadístico con el programa SPSS v.25. Se evaluó la normalidad de los datos con la prueba de Shapiro-Wilk debido al tamaño de la muestra, ya que los datos mostraron un comportamiento no normal, se realizó la prueba de U de Mann-Whitney para identificar diferencias entre las concentraciones de IL-23 y las variables de edad, peso, talla e índice de masa corporal (IMC) entre la clase molar I y II. Para evaluar diferencias entre el sexo femenino y masculino se realizó una prueba de χ². Por último, para las correlaciones entre los niveles de IL-23 y las variables evaluadas se realizó una correlación de Spearman. Una p ≤ 0.05 se consideró como significativa.

RESULTADOS

DATOS SOCIODEMOGRáFICOS

Se incluyeron 19 pacientes con clase molar I y 10 pacientes con clase molar II con dentición mixta temprana y rango de edad de siete a ocho años. Se observó una tendencia en presentar sobrepeso en los pacientes con clase molar II; sin embargo, ninguno niño presentó enfermedades sistémicas o enfermedades en la cavidad oral (Tabla 1).

NIVELES DE IL-23 EN SALIVA DE NIñOS CON DENTICIóN MIXTA CLASE MOLAR I Y II

No se observó diferencia significativa en los niveles de IL-23 en saliva del grupo con clase molar I (59.76 ± 21.66) pg/mL y clase molar II (51.03 ± 20.91) pg/mL (Figura 1). Sin embargo, los pacientes con clase molar I mostraron una tendencia a tener niveles más elevados de IL-23 en saliva que los pacientes con clase molar II.

CORRELACIONES

Se realizó un análisis de correlación de Spearman y no se encontró ningún tipo de correlación de la IL-23 con las variables de edad, peso, talla e IMC. Sin embargo, se observó una correlación significativamente positiva entre la edad y el peso, la edad y la talla, así como entre el peso y la talla. Por otra parte, apreciamos una correlación significativamente negativa entre la talla y el IMC (Tabla 2).

DISCUSIóN

Durante la fase de erupción dental mixta se puede conocer el tipo de oclusión que se establece una vez que el primer molar inferior contacta con el primer molar superior. El sistema estomatognático de los individuos con clase I presenta características de bases esqueléticas equilibradas y sus funciones se realizan con normalidad. Sin embargo, en los individuos con clase molar II y III existe un desequilibrio estructural que predispone a que algunas funciones se presenten modificadas.¹⁷ Además, se ha observado una relación de malnutrición en sujetos que presentan maloclusiones.¹⁸

Por otra parte, se conoce que cuando hay movimientos de masticación se ejerce una fuerza que varía de acuerdo al tipo de oclusión y relación dental.¹⁴ En este sentido, se ha observado en ratas un aumento en la expresión de RANKL en dientes con trauma oclusal que sin trauma oclusal,¹⁵ aunque en dientes permanentes y deciduos en niños con dentición mixta no se detectaron diferencias significativas entre los dos grupos de dientes, por lo cual se considera que el RANKL se mantiene constante durante el proceso de recambio dental.¹⁶

También se conoce que la fuerza que ejerce la oclusión dental es distinta a la que se ejerce por tratamiento ortodóncico. En este sentido, se ha evaluado la IL-23 e IL-17 en el líquido crevicular gingival de pacientes con tratamiento ortodóncico y se observó un aumento de estas citocinas a las 24 horas de haberse aplicado la fuerza ortodóntica en comparación con los niveles basales.¹⁹

Cabe señalar que la IL-23 es una citocina proinflamatoria que participa en la activación y maduración de las células Th17. Esta citocina ha sido estudiada en distintas patologías, principalmente en las que involucran alguna afección ósea como la periodontitis, artritis reumatoide, síndrome de Sjogren, entre otras.^20-23 Sin embargo, no se ha evaluado la IL-23 en procesos fisiológicos de desarrollo como el proceso de la erupción dental.

Partiendo de este estudio, se decidió evaluar la IL-23 en saliva en la fase de dentición mixta de niños que presentan clase molar I o II, debido a que en la fase de dentición mixta ésta activa la osteoclastogénesis y la osteogénesis, y además estos procesos están regulados principalmente por RANKL, que es estimulado por la IL-23 y su receptor (IL-23R).²⁴

Los resultados de este estudio mostraron concentraciones similares de IL-23 entre la clase molar I y II con una tendencia a elevarse en los pacientes con clase molar I. Hasta el momento, los hallazgos de este estudio piloto indican que la regulación molecular de IL-23 a nivel sistémico en este proceso fisiológico no difiere de la disposición dental que se presenta en cada fase de la erupción dental. Por otra parte, la muestra biológica de saliva proporciona información sólo de forma sistémica; sin embargo, el líquido crevicular gingival (LCG) podría brindar mayor información de este comportamiento a nivel localizado y sistémico. Por lo que consideramos evaluar posteriormente la IL-23 en muestras de líquido (LCG), ya que es una muestra biológica que se ha utilizado para la evaluación de distintas citocinas como IL-23, IL-17, TNF-α, IL-8, IL-6, IL-2, IL-4, IL-10, RANTES, IL-1, IL-5, RANKL, entre otras. Además, la evaluación de citocinas en LCG proporciona información de la zona donde se lleva a cabo el proceso de erupción dental. Cabe mencionar que la IL-23 se ha evaluado en LCG de pacientes con periodontitis, diabetes mellitus, artritis reumatoide, entre otras patologías, así como en prueba de materiales dentales como los implantes;^25-29 sin embargo, no se ha evaluado esta citocina durante el proceso fisiológico de la erupción dental. Cabe señalar que se considera aumentar el tamaño de la muestra para obtener resultados contundentes de la IL-23 en el proceso de dentición mixta.

Respecto a las correlaciones, esperábamos encontrar algún tipo de correlación de la IL-23 con los grupos de clase molar I y II. Sin embargo, no se detectó ningún tipo de correlación, lo que indica que este comportamiento puede deberse a que no se detectaron diferencias significativas entre los dos grupos de estudio. Nuevamente consideramos que se debe primero aumentar el tamaño de la muestra del estudio en muestras de saliva y además realizar también la evaluación de la IL-23 en el LCG y después analizar las correlaciones de esta citocina con respecto a la clase molar.

Sin embargo, el estudio permitió observar correlaciones positivas entre la edad y el peso, la edad con la talla así como del peso con la talla, lo que indica que estas variables aumentan de forma directamente proporcional. Debido a que es indispensable medir la talla, el peso y la edad para obtener el IMC, se esperaba obtener correlaciones positivas entre la talla y el peso con el IMC. Sin embargo, se encontró una correlación negativa entre la talla y el IMC, la cual indica que cuando una variable aumenta la otra disminuye. Cabe la posibilidad de que la falta de correlaciones positivas con el IMC se deba a la tendencia de sobrepeso observada principalmente en el grupo de niños con clase molar II. Esto es interesante de estudiar, si el normopeso, sobrepeso u obesidad de los niños influye en la malocluisón dental.

Asimismo, se pretende evaluar las concentraciones de IL-23, IL-17 y RANKL en la fase de erupción decidua, mixta temprana, mixta tardía y en dentición permanente. De esta forma podremos conocer cómo fluctúan estas moléculas durante todo el proceso de erupción dental.

CONCLUSIóN

Se observó una tendencia de niveles elevados de IL-23 en los pacientes con clase molar I sin diferencia significativa. Hasta el momento, este estudio piloto indica que la regulación molecular de IL-23 en este proceso fisiológico no difiere de la disposición dental que se presenta en cada fase de la erupción dental.

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AFILIACIONES

¹ Especialidad en Odontopediatría. Departamento de Clínicas Odontológicas Integrales. Centro Universitario de Ciencias de la Salud. Universidad de Guadalajara. Guadalajara, Jal. México.

² Instituto de Investigación en Odontología. Departamento de Clínicas Odontológicas Integrales. Centro Universitario de Ciencias de la Salud. Universidad de Guadalajara. Guadalajara, Jal. México.

CORRESPONDENCIA

Ruth Rodríguez Montaño. E-mail: ruth_rodriguez21@outlook.com

Recibido: Diciembre 2020. Aceptado: Abril 2021.