2026, Número 2
Efecto de la ozonoterapia en la cicatrización de heridas quirúrgicas en ratones BALB/c
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10.35366/123342
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Idioma: Español
Referencias bibliográficas: 26
Paginas: 104-111
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RESUMEN
La cicatrización es un proceso esencial para la reparación cutánea. Con el objetivo de restaurar la función protectora de la piel, se han propuesto terapias como la ozonoterapia, que estimula la angiogénesis, activa vías metabólicas aeróbicas y aumenta factores de crecimiento. Este trabajo evalúa el efecto de la ozonoterapia en la cicatrización de heridas quirúrgicas no complicadas en ratones BALB/c, mediante análisis macro- y microscópico. Realizamos un estudio experimental en 32 ratones BALB/c, divididos en cuatro grupos según la dosis de ozono aplicada tras herida quirúrgica. La cicatrización fue valorada a los 14 días postoperatorios. Se observó una menor incidencia de dehiscencias y una mejor maduración tisular en el grupo que recibió tres dosis de ozono. Hubo un aumento significativo en la formación y maduración de la colágena. El análisis estadístico evidenció diferencias significativas frente al grupo control. Los hallazgos sugieren que el ozono puede mejorar la calidad de la cicatrización en modelos sanos, lo que justifica la necesidad de realizar más estudios clínicos para seguir revisando su eficacia y aplicabilidad.ABREVIATURAS:
- ANOVA = ANalysis Of VAriance (análisis de varianza)
- HSD = Honestly-Significant Difference (diferencia verdaderamente significativa)
INTRODUCCIóN
La cicatrización es un proceso esencial para la piel, cuyo objetivo es restaurar su función protectora.1 Se define como la reparación de una herida mediante un proceso biológico complejo que culmina con la formación de un tejido funcional.2 Tras una lesión, se activan respuestas inflamatorias que liberan múltiples señalizadores que estimulan la proliferación y migración celular.2
La pérdida de la homeostasis en el proceso de cicatrización puede provocar alteraciones como una proliferación celular excesiva, lo que da lugar a diversas patologías en la reparación de la piel.3,4 Por ello, el desarrollo de terapias que favorezcan y regulen adecuadamente la cicatrización es un tema de interés en la investigación médica.5-9
El ozono ha sido una terapia ampliamente utilizada,10,11 y aunque no es una alternativa nueva, estudios recientes han validado su papel como modulador del proceso cicatrizal. Uno de los beneficios más importantes del ozono en cirugía plástica es su función angiogénica, que promueve la formación de tejido de granulación y acelera el cierre de heridas. Además, permite activar vías metabólicas aeróbicas y aumentar la expresión de factores clave como el factor inducido por hipoxia (HIF-1α), el factor de crecimiento transformante beta-1 (TGF-β1), el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).12-15
Aunque se usa principalmente en cicatrización retardada o patológica, es importante evaluar su efecto en heridas en modelos sanos.14,15 Este estudio analiza el impacto del ozono, tanto macroscópico como microscópico, como modulador de la cicatrización en heridas ideales (bien afrontadas y sin signos de infección).13,16,17
MATERIAL Y MéTODO
Se realizó un estudio experimental aleatorizado con 32 ratones BALB/c de 6-8 semanas de edad y peso entre 17-35 gramos, divididos en cuatro grupos (n = 8). El grupo control (G1) no recibió ozono, mientras que los grupos G2, G3 y G4 recibieron una, dos y tres dosis de ozono, respectivamente, en distintos días postoperatorios. Tras 14 días, se tomó una biopsia de todos los especímenes para su análisis.
El protocolo fue aprobado por el Comité de Investigación y Ética de la Universidad Autónoma de Chihuahua según la normativa vigente para investigación en animales.18
PROCEDIMIENTO QUIRÚRGICO
Se rasuró y desinfectó el área a intervenir con clorhexidina, aplicando anestesia local con 1 mL de xilocaína disuelta en 10 mL de solución fisiológica. Se realizó una escisión fusiforme con bisturí número 15 en la línea media del dorso superior de 10 mm de longitud por 5 mm de ancho y 3 mm de profundidad; la herida se suturó en plano subdérmico con Prolene 6-0. Todos los ratones recibieron paracetamol diluido en agua (200 mg/mL) hasta cinco días postoperatorios. Durante los 14 días de observación, se administró analgesia complementaria en caso de detectar signos de dolor, según la escala visual de dolor facial.
La terapia con ozono se aplicó según el grupo: G1 no recibió ozono; G2 recibió una dosis de 60 μg/mL en el postoperatorio inmediato; G3, dos dosis de 60 μg/mL en el postoperatorio inmediato y al quinto día, y G4, tres dosis de 60 μg/mL en el postoperatorio inmediato, al quinto y al décimo día.
Al día 14 postquirúrgico, se realizó la eutanasia de todos los animales mediante sobredosis de anestesia y se recolectaron las muestras de tejido de cada grupo, tomando como margen quirúrgico los bordes libres a 3 mm de cada lado de la herida quirúrgica.
ANÁLISIS MORFOLÓGICO
Al día 14 postquirúrgico, se evaluó la cicatrización con la escala de Vancouver, un instrumento objetivo paciente-observador, reconocido para valorar la calidad cicatricial. Analiza tres variables: vascularización, altura y pigmentación (0-5 puntos cada una, máximo 15).12 La evaluación macroscópica fue ciega; la realizó el Dr. Raúl Manuel Favela Campos, cirujano plástico previamente capacitado, para asegurar reproducibilidad y objetividad.
ANÁLISIS HISTOPATOLÓGICO
Las muestras de piel y tejidos blandos se fijaron en formol al 10% y se procesaron mediante tinciones con hematoxilina-eosina y tricrómico de Masson. La cicatrización se evaluó con microscopia óptica según la escala de Gupta y su colega,19 basada en tejido de granulación, infiltrado inflamatorio, orientación y patrón de las fibras de colágena. El análisis se realizó de forma ciega por un especialista en anatomía patológica, previamente capacitado. Así, tanto la evaluación morfológica como histopatológica se efectuaron a doble ciego con observadores entrenados.
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para el análisis estadístico se compararon los grupos con y sin ozono a nivel macroscópico y microscópico usando el análisis de varianza (ANOVA) y Tukey HSD para variables numéricas, considerando p ≤ 0.05 estadísticamente significativo. Para procesar los datos, se usó el programa IBM SPSS v 25.0. Se eligió ANOVA debido a que permite comparar múltiples grupos con variables numéricas, como las puntuaciones de la escala de Vancouver.
Los resultados histopatológicos, originalmente cualitativos, se convirtieron en variables numéricas según la escala de Gupta y su colega,19 que asigna valores del 1 al 4 para cada componente (tejido de granulación, infiltrado inflamatorio, orientación y patrón de la colágena), permitiendo su análisis con ANOVA y la comparabilidad entre grupos.
RESULTADOS
La media de peso del grupo experimental fue de 24.59 gramos, con 14 hembras y 18 machos. Se registraron cuatro defunciones: tres preoperatorias, por sobredosis anestésica, y una al día 19 (Tabla 1).
En el grupo 1 (control) se observaron dos dehiscencias parciales y una defunción preoperatoria. En el grupo 2, hubo una dehiscencia completa, dos parciales y una de dos puntos, todas en el primer día postoperatorio, además de una defunción preoperatoria. El grupo 3 presentó una dehiscencia de dos puntos en el primer día postoperatorio y una defunción preoperatoria. En el grupo 4, se registró sólo una dehiscencia de un punto el primer día postoperatorio.
ANÁLISIS HISTOPATOLÓGICO (TABLA 2)
En el grupo 1, el puntaje promedio fue de 14.57, con tejido de granulación escaso, infiltrado inflamatorio leve, fibras de colágena horizontales con patrón fasciculado, colágena inmadura y madura moderada.
El grupo 2 obtuvo 15.63 puntos, con hallazgos similares al grupo 1 (tejido de granulación escaso, infiltrado inflamatorio leve, fibras de colágena horizontales con patrón fasciculado), pero con mínima colágena inmadura y colágena madura moderada.
El grupo 3 alcanzó 16.25 puntos, también con escaso tejido de granulación, infiltrado inflamatorio leve, fibras de colágena horizontales con patrón fasciculado, mínima colágena inmadura y mínima colágena madura.
El grupo 4 presentó el puntaje más alto (18.29), sin tejido de granulación, leve infiltrado inflamatorio, fibras de colágena horizontales con patrón fasciculado, mínima colágena inmadura y moderada colágena madura.
ANÁLISIS MORFOLÓGICO
La escala de Vancouver mostró que el grupo 2 tuvo el promedio más alto (3 puntos), los grupos 1 y 3 obtuvieron 2, y el grupo 4 el más bajo (1), indicando una mejor calidad en la cicatrización (Tabla 2).
ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para el análisis estadístico, se estudió la puntuación total de la escala histopatológica por grupo: grupo 1 (control), grupo 2 (una dosis de ozono), grupo 3 (dos dosis) y grupo 4 (tres dosis). Se comparó el grupo control contra los grupos tratados con ozono mediante la prueba t de Student, obteniendo un valor de p = 0.0078, lo que indica una diferencia muy significativa.
Se aplicó el ANOVA para comparar las medias de los cuatro grupos. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
Tras confirmar con ANOVA que al menos una media difiere, se aplicó la prueba Tukey HSD (Honest Significant Difference) para identificar qué grupos presentan diferencias significativas. Los valores críticos fueron: HSD0.05 = 2.7484, HSD0.01 = 3.4567, Q0.05 = 3.9013 y Q0.01 = 4.9068. La única comparación significativa fue entre el grupo 1 (control) y el grupo 4 (tres dosis de ozono), con Q = 5.27 y p = 0.00538, significativa al 1%. Las demás comparaciones no mostraron diferencias estadísticas. Esto indica que solo el grupo 4 difiere significativamente del control, mientras que los demás grupos no presentan diferencias relevantes.
DISCUSIóN
La dehiscencia de herida es una complicación frecuente, que suele ocurrir entre el séptimo y décimo cuarto días del postquirúrgico; aumenta costos médicos, provoca reintervenciones y afecta el bienestar del paciente.20-22 En este estudio, se registraron ocho dehiscencias, que variaron de parciales a completas, aunque todas las heridas cerraron finalmente por segunda intención.23-25
En el estudio de Pchepiorka y su equipo,10 la ozonoterapia aplicada los días 1, 3 y 7, tras inducir úlceras orales en ratas, mostró mayor angiogénesis al día 3, e incremento de fibroblastos al día 7, frente al grupo control. Aunque nuestro estudio no evaluó angiogénesis, se observó mejor calidad cicatricial, tanto visual como histológica, incluso en heridas con dehiscencia, hallazgos comparables a los de dicho estudio.10
Aunque el análisis histológico mostró una diferencia significativa entre el grupo control y el tratado con tres dosis de ozono (p = 0.00538), la escala de Vancouver no evidenció cambios estadísticamente significativos (p = 0.17). Esto sugiere que los cambios tisulares más relevantes podrían no ser evidentes clínicamente, destacando el valor del análisis histopatológico como herramienta complementaria en futuros protocolos.
De forma similar, Alan y colaboradores11 compararon ozono y láser diodo en heridas cutáneas en ratas durante siete días. Aunque no hallaron diferencias clínicas significativas, histológicamente sí observaron menor inflamación al día 3, así como mayor fibrosis y tejido de granulación al día 14 en el grupo con ozono (Figura 1). Nuestro estudio mostró una diferencia significativa entre el grupo control y los tratados con ozono (p = 0.0078), pero no entre las distintas dosis, lo que resalta la necesidad de más estudios para definir la dosis óptima y considerar factores como tipo de herida y comorbilidades.20,26
CONCLUSIóN
Los resultados obtenidos en este estudio sugieren que la aplicación de ozonoterapia tiene un impacto positivo en el proceso de cicatrización de heridas en ratones BALB/c. A nivel histopatológico, se observó una diferencia significativa en la organización de la colágena y la maduración del tejido cicatricial en el grupo que recibió tres aplicaciones de ozono comparado con el grupo control (p = 0.00538), lo que indica que el ozono mejora la calidad de la cicatriz en modelos experimentales sanos. Estos hallazgos respaldan su potencial terapéutico y justifican la realización de estudios en humanos y en distintos tipos de heridas para validar su eficacia clínica.
REFERENCIAS (EN ESTE ARTÍCULO)
Talbott H, Mascharak S, Griffin M, Wan DC, Longaker MT. Wound healing, fibroblast heterogeneity, and fibrosis. Cell Stem Cell. 2022; 29 (8): 1161-1180. Disponible en: https://www.cell.com/cell-stem-cell/fulltext/S1934-5909(22)00301-0?_returnURL=https%3A%2F%2Flinkinghub.elsevier.com%2Fretrieve%2Fpii%2FS1934590922003010%3Fshowall%3Dtrue
AFILIACIONES
1 Hospital Central Universitario del Estado de Chihuahua, Universidad Autónoma de Chihuahua (UACh). México. ORCID: 0000-0003-4169-8700
2 Hospital Regional No. 1 Unidad Morelos, UACh. México.
3 UACh. México.
4 ORCID: 0009-0008-7932-7829
5 ORCID: 0009-0009-1808-5544
6 ORCID: 0000-0002-0828-7291
7 ORCID: 0009-0003-2692-5095
8 ORCID: 0009-0003-3316-8862
9 ORCID: 0009-0007-4515-9815
10 ORCID: 0009-0008-3874-7480
11 ORCID: 0009-0005-5538-1909
12 ORCID: 0009-0001-8407-9363
13 ORCID: 0009-0003-3398-6996
14 ORCID: 0009-0008-2625-4013
15 Hospital Ángeles Chihuahua. México. ORCID: 0000-0002-6098-5644
Conflicto de intereses: los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
CORRESPONDENCIA
Dr. Claudio Reyes Montero. E-mail: reyesmontero908@gmail.comRecibido: 15 septiembre 2025. Aceptado: 30 octubre 2025